二氧化碳培养箱的清洁、消毒和灭菌处理

二氧化碳培养箱的清洁、消毒和灭菌处理

二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上，通过在培养箱内模拟形成一个类似细胞在生物体内的生长环境，如合适的温度（37°C）、恒定的二氧化碳水平（常用5%）、稳定的酸碱度（pH值7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（常用95%），来对细胞或组织进行体外培养的一种装置。广泛应用于细胞学实验、微生物学实验、组织学实验以及分子生物学实验。因此，二氧化碳培养箱的消毒、灭菌尤为重要。 

凡混入二氧化碳培养箱（细胞培养环境）中，对细胞生存有害的成分或造成细胞不纯的异物都应视为污染。细胞持续在污染环境中生长时，轻者生长缓慢、分化变形，较严重的情况则细胞增殖停止，从瓶壁脱落，甚至死亡。不同的污染物对细胞的影响也有差别，有的影响是长期、缓慢和潜在的，有的则在很短的时间内抑制细胞生长，或产生有毒物质灭细胞。根据污染源不同主要可以分为：生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。

这是最常见也是危害最大的污染，如细菌、病毒、真菌，支原体等。这些污染源有可能是人为带入，或是细胞在放入培养箱之前已经被污染，再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也有限，因此细胞微生物污染一旦发生往往无法挽救。

培养箱中许多化学物质都会引起细胞污染，如细胞培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体。不同化学物质对细胞污染是不一样的，有的可能促进或抑制细胞生长，有的可能杀死细胞。

培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射（紫外线或荧光）会对细胞产生影响。物理性污染常常被人们所忽视，或被笼统地归为化学性污染。其主要是在代谢水平或分子水平上，影响细胞正常的生理过程。

气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系，当微粒是微生物时，就是微生物气溶胶，如果这种微生物是病原性的，就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。

微生物气溶胶可分为两大类：一类是飞沫核气溶胶，另一类是粉尘气溶胶。医学实验室内许多操作都可以产生气溶胶，并且大多可能是病原微生物形成的感染性气溶胶，由于其气溶胶分子小，漂浮在空气中、粘附于人身上，易在空气中扩散而污染实验室的空气。

（3）清洗玻璃门：清洗箱内的玻璃门所用的清洁剂与清洗培养箱内部时使用的相同。然后用蒸馏水漂洗，从而清除残留的清洁剂，最后用软布把门擦干。

消毒是指杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其孢子。灭菌是指杀死所有微生物，当培养箱内细胞受到污染时需采用灭菌措施。一般，在培养箱内细胞没有污染的情况下平均1-3个月消毒一次。常用的三种消毒灭菌的方式是：液体消毒剂、紫外和加热。

（1）液体消毒剂：选择对培养箱无腐蚀性的液体消毒剂。液体消毒剂的消毒效果好坏和很多因素有关，比如场所的温度、接触时间、pH、穿透能力、有机物的反应，这些因素中一些很小的变化可能造成去污效果的不同。因此液体去污剂不是可信赖的方法。

（2）紫外：一般先用蒸馏水清洗干净后，再用紫外灯照射（带紫外灯的培养箱）一天，或者用手提式的紫外灯照射。

（3）加热：湿热和干热被认为是杀菌有效的方法。干热160℃-170℃、2-4小时在不具有渗透性、非有机体的物质（如玻璃）是可行的净化方法, 但是甚至在有机体或非有机体的浅层也不能被绝缘。

（3）挥发性的甲醛有毒、易燃、易爆。如果在培养箱内残留甲醛的话，会影响细胞正常生长，甚至使细胞死亡。

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